ELISA實驗中兩種洗板方法介紹
日期:2022-06-21 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽:1130 次
中海生物在ELISA實驗操作中,洗板有手動洗板和洗板機洗板兩種方法,兩者沒有本質(zhì)區(qū)別。只需操作符合規(guī)范標(biāo)準(zhǔn),就可獲得準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)論。
手動洗板是指在每次反應(yīng)溫育后,將反應(yīng)溶液吸出或干燥,然后用洗滌液填充板孔。靜置兩三分鐘后,將洗滌液吸出或晾干,然后在吸水紙上拍干。重復(fù)上述洗滌步驟三四次,最后在吸水紙上拍干。人工洗板人為因素大,實驗者必須經(jīng)驗豐富,洗的次數(shù)要足夠,沖擊力不能太大。洗滌液的加入量應(yīng)限制在剛好充滿反應(yīng)孔,以防止孔開口處的游離酶被洗去,同時防止液體在孔間交叉。洗完后扣干也很重要,否則容易造成假陽性。每次洗完板后,用吸水紙輕輕拍干,垂直做決定,避免交叉感染。不要用力過猛,防止抗原抗體復(fù)合物分離;吸水紙應(yīng)該是一次性的,使用不易脫落碎屑的吸水紙為宜。酶綴合物不耐干燥,尤其是在較高溫度下,因此更容易失活。所以應(yīng)盡可能縮短干燥后的反應(yīng)板在空氣中的暴露時間。時間越長,吸光度值越低。
洗板機是將人工操作變成洗板機工作,人為因素少/速度快/條件恒定。但是用洗板機洗板有一個特點就是每次洗板后都干不了,所以液體殘留比較多,需要增加洗板次數(shù)來減少這個物種誤差。洗板機洗板次數(shù)越少,假陽性率越高。本次實驗,洗一次板,假陽性率高達90%。洗板兩次后,假陽性率為38%。洗板三次假陽性率為2。洗板四五次,未發(fā)現(xiàn)假陽性。盤子洗的次數(shù)越多越好。次數(shù)太多不僅浪費人力物力,還會導(dǎo)致假陰性結(jié)果。所以一般試劑盒要求洗板四五次。洗板時,洗衣機要經(jīng)常檢查洗頭是否通暢。如果被雜物堵塞,可以用注射器針頭挑出來。為了達到更好的洗滌效果,實驗室可以采用機洗和手工洗滌相結(jié)合的方法。機洗后進行一兩次手動洗板,可達到理想的洗板效果。
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