瓊脂培養基制備使用介紹及注意要點

日期：2022-06-07　|　中海生物技術文庫　|　瀏覽：3376 次

瓊脂(Agar)是一類從植物中提取的多糖，主要是源自于海藻植物。在微生物培養基中，瓊脂通常只用作凝固劑。液體培養基中瓊脂的用量通常為0.5~2g/L，使培養基擁有相應的粘性，避免液體對流。它經常使用于厭氧培養。半固體培養基瓊脂用量通常為3.5~4g/L，經常使用于菌種保藏、動態試驗等。植物組織培養基中瓊脂的用量通常為5~10g/L，固體培養基中瓊脂的用量通常為5~10g/L。通常瓊脂粉為白色、淺黃色或淺灰色粉末，不溶解于冷水。大多數瓊脂的熔點在90℃左右，冷卻后大多數瓊脂的冰點在40℃左右。反復加熱冷卻可以使瓊脂多次由液態變為固態，但瓊脂的凝膠強度會愈來愈低。

一、瓊脂培養基制備使用

①依據瓊脂培養基的產品標簽，稱取適量培養基干粉，溶解于純凈水中，加熱煮沸至瓊脂完全溶解，分裝于試管或錐形瓶中；

②在規定的條件下對包裝好的培養基進行滅菌。加熱滅菌后的培養基可反復煮沸4~6次，一直到中海培養基完全溶解，然后倒入平板中待用；

③滅菌后，待培養基冷卻至50℃左右時，可放至47~50℃的水浴中保溫。水浴溫度可依據中海生物瓊脂培養基實際凝固溫度適當提高，存放時間通常不超過四個鐘頭；

④使用前，加入相應的添加劑成分，搖勻，倒入平板中，凝固后備用；或制成斜面，投入使用等。

二、瓊脂培養基注意要點

①溶解干粉時，提議水溫在40℃以下，不超過60℃。瓊脂遇到熱水，表面容易吸水變硬，不利于分散和溶解。所以干粉溶解時，宜用冷水并不斷攪拌，一直到分散均勻無結塊，后再加熱。

②滅菌前，須要將瓊脂加熱煮沸，使其完全溶解分散均勻后，方能進行試管或錐形瓶分裝，不然分裝后瓊脂可能分布不均、凝結；

③滅菌前加熱煮沸溶解還有助于加快高壓滅菌過程中的熱量滲透，提高滅菌效果，降低滅菌失敗的概率。

④凝固的培養基不能重新高溫高壓滅菌。倘若中海培養基中的成分穩定，可以在沸水浴中重新溶解以供一次使用。

⑤須要添加抗生素或其他不穩定成分的培養基應在使用前添加，當培養基冷卻至50~55℃時添加。過早或過燙加入這些成分，容易導致不穩定成分分解，降低培養基的使用效果；

⑥固化后的培養基不能反復加熱融化使用。反復加熱容易分解培養基中的營養物質，瓊脂的凝膠強度下降。通常允許成分穩定的培養基溶解一次使用。